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來源:康明永瑞 時間:2024-05-10 14:01:08 已閱:0次
我們都知道多肽是α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物,是蛋白質水解的中間產物。通常由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽,同理類推還有三肽、四肽、五肽等。由三個或三個以上氨基酸分子組成的肽叫多肽。多肽能夠廣泛的應用在生命科學、醫(yī)學、藥學、化學、材料科學等領域。一些需要多肽定制合成服務的朋友可能會對以下幾個問題比較關注,我們一起來盤點一下。
1.什么是多肽的凈含量(肽含量),它的意義是什么?
干品多肽的重量中不僅僅包含多肽,還包含有一些非肽的組份,如水,被吸收的溶劑、配位離子和鹽等。肽的凈含量是指肽在其中的重量百分比,這個百分比的數值范圍很大,可能從50%到90%,取決于純度、序列以及合成和純化的方法,不要將肽的凈含量和肽的純度混為一談,它們是完全不同的兩個概念。純度通常是由HPLC決定的。純度定義的是多肽樣品中含正確序列的組分的百分比,而肽的凈含量是指樣品中肽類物質相對于非肽類物質所占的百分比,肽的凈含量通常是用氨基酸組分分析或紫外分光法測定的。這個信息主要是在一些對肽的濃度很敏感的實驗中,對計算肽的濃度是很重要的。
2.為什么有些多肽的合成產率或純度會比較低?
多肽合成與引子合成有比較大的區(qū)別,不能合成的引子很少,但是不能合成的多肽經常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr這些氨基酸比鄰或重復時,多肽鏈在合成過程中不能完全舒展溶解,合成效率下降。以下幾種情形,合成效率和產物的純度都比較低,如:重復Pro,Ser-Ser,重復Asp,4個連續(xù)Gly等。
3.如何保存合成的多肽?
多肽一般長期保存需要避光保存,并應保存在-20度,短期可以保存在4度。可以短時間以室溫運輸。多肽在-20℃很穩(wěn)定,特別是冷凍干燥并保存在干燥器中,在將它們暴露于空氣之前, 冷凍干燥多肽可以放于室溫。這將是濕度影響減少,當無法冷凍干燥時,最好的方法是以小的工作樣量存放。
對于含Cys, Met orTrP的多肽,脫氧緩沖劑對其溶解必不可少,因為這種多肽可易空氣氧化,在封瓶前,慢慢流過多肽的氮氣或氬氣也會降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,與不含這些氨基酸的那些肽相比生命期有限。
4.如何從多肽序列中判定多肽的溶解性?
(1) 多肽中如果含有高比例的疏水性很強的氨基酸如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp,多肽很難溶解與水性溶液中或根本不可能溶解。這些氨基酸無論是純化或合成,都有可能有問題。
(2) 一般情況下疏水性氨基酸的比例<50%,不能連續(xù)5個連續(xù)氨基酸為疏水性,帶電荷的氨基酸的(正電荷K,R,H,N-terminus,負電荷D,E,C- terminus)的比例達到20%,在多肽的N或C短如果能增加極性氨基酸,也可以改善溶解性。
5.多肽的兩端應如何處理?是保持自由狀態(tài)還是屏蔽起來?
多肽是用來模擬蛋白的,為了模仿蛋白的表現,我們需要合成與蛋白有相似的結構和電荷的多肽。當一條肽段從一個蛋白中“切出”之后,兩端的電荷數將與基因體蛋白有差異。我們需要改變合成策略來使他們一致。 總體而言: 如果是出自蛋白C端的序列,通過乙酰化將N端屏蔽; 如果是出自蛋白N端的序列,通過酰胺化將C端屏蔽; 如果是出自蛋白中間部分,用乙酰化和酰胺化將兩端都屏蔽。